近年来,气相我国城市化和老龄化进程加快,色谱同时伴随着生活方式的法测改变,肥胖和超重人口数量增加,定沙糖尿病的格列发病率有逐年增高的趋势,沙格列汀作为一种高效的汀中二肽基肽酶-4(DPP-4)竞争性抑制剂,于2011年5月5日在中国获得上市批准(商品名,残留安立泽)用于治疗2型糖尿病,溶剂通过阻止内源性胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的气相快速降解,延缓肠促胰岛素的色谱失活,促进葡萄糖介导的法测胰岛素释放并减少餐后胰高血糖素释放,以改善餐后β细胞对葡萄糖的定沙反应。
根据ICHQ3C(R7)残留溶剂的格列指导原则,甲醇、汀中乙腈、残留二氯甲烷属于二类溶剂,异丙醇、乙酸乙酯属于三类溶剂,本实验采取气相色谱法对沙格列汀原料药中的这5种溶剂的残留量进行测定,为本品的质量研究和生产提供数据支持,为质量标准的制定提供依据。
SHIMADZUGC-2010气相色谱仪;氢火焰离子化检测器(FID);DB-624毛细管色谱柱(30m*0.32mm1.8μm)。
沙格列汀(合肥合源药业有限公司,批号:SG-190801R1、SG-190901R1、SG-190902R1);N-甲基吡咯烷酮(色谱纯);甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);异丙醇(色谱纯);二氯甲烷(色谱纯);乙酸乙酯(色谱纯)。
色谱柱:安捷伦DB-624毛细管色谱柱(30m*0.32mm1.8μm);检测器:氢火焰离子化检测器(FID);柱温采取程序升温,起始柱温40℃,维持8分钟,以每分钟40℃速率升温至200℃,维持13分钟;进样口温度:200℃;检测器温度:250℃;分流比:5︰1;柱流速:1.0mL/min;进样量:1.0μL;氮气流量:30mL/min;氢气流量:40mL/min;空气流量:400mL/min。
空白溶液:以N-甲基吡咯烷酮作为空白溶液。
溶剂定位溶液:取甲醇对照品、异丙醇对照品、乙腈对照品、二氯甲烷对照品和乙酸乙酯对照品各10μL,分别置10mL量瓶中,用N-甲基吡咯烷酮溶解并稀释至刻度,作为各溶剂定位溶液。
供试品溶液:取本品适量,精密称定,加N-甲基吡咯烷酮溶解并定量稀释制成每1mL中约含沙格列汀150mg的溶液,作为供试品溶液。
对照品溶液:取甲醇对照品、异丙醇对照品、乙腈对照品、二氯甲烷对照品、乙酸乙酯对照品适量,精密称定,加N-甲基吡咯烷酮制成每1mL中约含甲醇450μg、异丙醇750μg、乙腈61.5μg、二氯甲烷90μg和乙酸乙酯750μg的溶液,作为对照品溶液
按“2.1.2”项下方法配制溶剂定位溶液、供试品溶液、混合对照溶液和空白溶液。按“2.1.1”项下色谱条件测定,记录色谱图。试验结果表明,甲醇、异丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯间均能实现良好分离,分离度大于1.5,理论板数不低于5000,空白溶液不干扰测定,表明本方法专属性良好。
精密称取甲醇对照品451.3mg、异丙醇对照品749.0mg、乙腈对照品61.9mg、二氯甲烷对照品117.3mg和乙酸乙酯对照品751.2mg,置同一100mL量瓶中,用N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度,摇匀,得对照品母液,量取对照品母液按表1用N-甲基吡咯烷酮逐步稀释成一系列浓度。精密量取1.0μl,注入气相色谱仪,进行检测。线性结果见表2。
结果表明,甲醇,异丙醇,乙腈,二氯甲烷,乙酸乙酯在一定范围内,峰面积与浓度均成良好的线性关系。
分别称取甲醇,异丙醇,乙腈,二氯甲烷,乙酸乙酯适量,精密称定,加入N-甲基吡咯烷酮逐级稀释成一系列浓度的溶液,按“2.1.1”项下色谱条件测定,记录色谱图。取信噪比约为3作为检测限溶液,取信噪比约为10作为定量限溶液,试验结果见表3。
精密称取各溶剂适量,配成各定量限浓度的混合溶液,精密量取1.0μL,注入气相色谱仪,连续进样6次,记录色谱图。
试验结果表明,各溶剂在定量限浓度下重复进样检测,峰面积RSD<10.0%,保留时间RSD≥1.0%,表明本方法进样精密度良好。
取“2.2.2”项下的对照品母液,量取对照品母液1.0mL,置1mL量瓶中,加N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度,摇匀,得对照品溶液。
精密称取沙格列汀原料约1.5g,9份,分别置于10mL量瓶中,分别精密量取对照品母液0.5mL、1.0mL和1.5mL各3份,加N-甲基吡咯烷酮溶解并稀释至刻度,摇匀,作为50%、100%、150%限度浓度回收率供试液。按“2.1.1”项下色谱条件测定,计算回收率。试验结果见表4。
结果表明,甲醇、异丙醇、乙腈、乙酸乙酯和二氯甲烷的回收率均在85%~110%,RSD均≤10%,本方法准确度良好。
照“2.1.2”项下方法配制对照品溶液和供试品溶液,取1.0μL注入气相色谱仪,以峰面积按外标法计算样品中溶剂含量。结果见表5。
结果表明,3批样品中残留溶剂的含量均符合《中国药典》2020年版四部规定。
对于残留溶剂检测通常用气相色谱进行检测,其检测方法的开发相对简单,适用范围广。进样方式一般为顶空进样或直接进样,直接进样有很大的溶剂峰,气相色谱一般会选用低沸点的溶剂,这样就会对低沸点的残留溶剂检测造成很大的干扰,因此直接进样一般用于高沸点的溶剂检测,顶空进样用于低沸点的溶剂检测。色谱柱选择毛细管色谱柱,因其分离效率高,色谱柱固定液的选择根据“相似相溶”的原理,以待分析的溶剂极性选择合适的色谱柱。
本实验采用直接进样法测定沙格列汀原料药中5种残留溶剂的含量,经实验验证,甲醇、异丙醇、乙腈、二氯乙烷、乙酸乙酯分离度良好,理论板数大于5000,空白溶液不干扰测定,系统适应性良好。各溶剂线性相关系数均大于0.99,回收率均在85%~110%。本方法简便,快速,准确,适用于沙格列汀原料药中残留溶剂的测定。
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